Anlage 4 VO (EU) 2019/1390

Anlage 3Anlage 3.2

SCHLÜSSELPARAMETER UND AKZEPTANZKRITERIEN FÜR DIE QUALIFIZIERUNG EINES HPLC/UPLC-SPEKTROPHOTOMETRIESYSTEMS ZUR MESSUNG VON AUS RHE-GEWEBEN EXTRAHIERTEM MTT-FORMAZAN

Parameter Protokoll abgeleitet aus FDA-Leitlinie (36) (37) Akzeptanzkriterien
Selektivität Analyse von Isopropanol, Blindprobe lebend (Isopropanol-Extrakt aus lebenden RhE-Geweben ohne Behandlung), Blindprobe abgetötet (Isopropanol-Extrakt aus abgetöteten RhE-Geweben ohne Behandlung) FlächeInterferenz ≤ 20 % FlächeLLOQ(1)
Präzision Qualitätskontrollen (d. h. MTT-Formazan bei 1,6 μg/ml, 16 μg/ml und 160 μg/ml) in Isopropanol (n=5) VK ≤ 15 % bzw. ≤ 20 % für LLOQ
Genauigkeit Qualitätskontrollen bei Isopropanol (n=5) % Abw. ≤ 15 % bzw. ≤ 20 % für LLOQ
Matrixeffekt Qualitätskontrollen bei Blindprobe lebend (n=5) 85 % ≤ Matrixeffekt % ≤ 115 %
Übertragung Analyse Isopropanol nach einem ULOQ(2)-Standard FlächeInterferenz ≤ 20 % FlächeLLOQ
Reproduzierbarkeit (innerhalb eines Tages)

3 unabhängige Eichkurven (aufgrund von 6 aufeinander folgenden Verdünnungen von MTT-Formazan in Isopropanol im Verhältnis 1:3 beginnend mit der ULOQ, d. h. 200 μg/ml);

Qualitätskontrollen bei Isopropanol (n=5)

Eichkurven: % Abw. ≤ 15 % bzw. ≤ 20 % für LLOQ

Qualitätskontrollen: % Abw. ≤ 15 % und VK ≤ 15 %
Reproduzierbarkeit (innerhalb eines Tages)
Tag 1:
1 Eichkurve und Qualitätskontrollen in Isopropanol (n=3)
Tag 2:
1 Eichkurve und Qualitätskontrollen in Isopropanol (n=3)
Tag 3:
1 Eichkurve und Qualitätskontrollen in Isopropanol (n=3)
Kurzzeitstabilität von MTT-Formazan in RhE-Gewebeextrakt Qualitätskontrollen in Blindproben lebend (n=3), die am Tag der Vorbereitung sowie nach 24-stündiger Lagerung bei Raumtemperatur analysiert wurden. % Abw. ≤ 15 %
Langzeitstabilität von MTT-Formazan in RhE-Gewebeextrakt (erforderlichenfalls) Qualitätskontrollen in Blindproben lebend (n=3), die am Tag der Vorbereitung sowie nach mehrtägiger Lagerung bei einer spezifizierten Temperatur (z. B. 4 oC, -20 oC, -80 oC) analysiert wurden. % Abw. ≤ 15 %

Fußnote(n):

(1)

LLOQ: Untere Quantifizierungsgrenze, definiert als Gewebeviabilität von 1-2 %, d. h. 0,8 μg/ml.

(2)

ULOQ: Obere Quantifizierungsgrenze, definiert als mindestens zweimal so hoch wie die erwartete MTT-Formazan-Konzentration in Isopropanol-Extrakten aus Negativkontrollen, d. h. 200 μg/ml.

© Europäische Union 1998-2021

Anlage 3Anlage 3.2

Tipp: Verwenden Sie die Pfeiltasten der Tastatur zur Navigation zwischen Normen.