Geltungsbereich

Dieser Anhang gilt für Produkte zum Nachweis oder zur Quantifizierung von Markern für eine Infektion mit dem humanen T-Zell-Leukämie-Virus (HTLV). Tabelle 1 gilt für erstmalige Tests für Antikörper gegen HTLV I oder II (Anti-HTLV I/II), bei denen es sich nicht um Schnelltests handelt. Tabelle 2 gilt für erstmalige Tests für Anti-HTLV I/II, bei denen es sich um Schnelltests handelt. Tabelle 3 gilt für Bestätigungstests für Anti-HTLV I/II. Tabelle 4 gilt für NAT-Produkte für Anti-HTLV I/II.

Tabelle 1. Erstmalige Tests: Anti-HTLV I/II

Leistungsmerkmal	Probe	Probenzahl, Merkmale, Verwendung	Akzeptanzkriterien
Diagnostische Sensitivität	Positive Proben	≥ 300 HTLV-I ≥ 100 HTLV-II darunter 25 positive frische Serumproben vom gleichen Tag (≤ 1 Tag nach Probenahme)	Für alle echt positiven Proben muss ein positiver Befund angezeigt werden.
	Serokonversionspanels	Festzulegen, wenn verfügbar	Gegebenenfalls muss die diagnostische Sensitivität während der Serokonversion dem Stand der Technik entsprechen.
Diagnostische Spezifität	Nicht selektierte Blutspender (einschließlich Erstspender)(1)	≥ 5000	≥ 99,5 %
	Krankenhauspatienten	≥ 200	Etwaige Einschränkungen der Spezifität sind anzugeben.
Kreuzreaktivität	Proben mit möglicher Kreuzreaktion	≥ insgesamt 100 (z. B. RF+, von verwandten Virusinfektionen, von Schwangeren)

Tabelle 2. Schnelltests: Anti-HTLV I/II

Leistungsmerkmal	Probe	Probenzahl, Merkmale, Verwendung	Akzeptanzkriterien
Diagnostische Sensitivität	Positive Proben	≥ 300 HTLV-I ≥ 100 HTLV-II	Für alle echt positiven Proben muss ein positiver Befund angezeigt werden.
	Serokonversionspanels	Festzulegen, wenn verfügbar	Gegebenenfalls muss die diagnostische Sensitivität während der Serokonversion dem Stand der Technik entsprechen.
Diagnostische Spezifität	Nicht selektierte Blutspender (einschließlich Erstspender)	≥ 1000	≥ 99 %
	Krankenhauspatienten	≥ 200	Etwaige Einschränkungen der Spezifität sind anzugeben.
Kreuzreaktivität	Proben mit möglicher Kreuzreaktion	≥ 200 Proben von Schwangeren ≥ insgesamt 100 weitere Proben mit möglicher Kreuzreaktion (z. B. RF+, von verwandten Infektionen)

Tabelle 3. Bestätigungstests: Anti-HTLV I/II

Leistungsmerkmal	Probe	Probenzahl, Merkmale, Verwendung	Akzeptanzkriterien
Diagnostische Sensitivität	Positive Proben	≥ 200 HTLV-I ≥ 100 HTLV-II	Bestimmung als „bestätigt positiv” oder „unbestimmt” , nicht als „negativ”
	Serokonversionspanels	Festzulegen, wenn verfügbar	Gegebenenfalls muss die diagnostische Sensitivität während der Serokonversion dem Stand der Technik entsprechen.
Diagnostische Spezifität	Blutspender	≥ 200	Keine falsch positiven Befunde
	Krankenhauspatienten	≥ 200
Kreuzreaktivität	Proben mit möglicher Kreuzreaktion	≥ insgesamt 50 (darunter Proben von Schwangeren, Proben mit unbestimmten Befunden aus anderen Bestätigungstests)

Tabelle 4. NAT-Produkte für HTLV I/II

1.

Bei Produkten zur Amplifikation von Zielsequenzen entspricht eine Funktionskontrolle für jede Probe (interne Kontrolle) dem Stand der Technik. Bei dieser Kontrolle soll möglichst das ganze Verfahren, d. h. die Extraktion, Amplifikation/Hybridisierung und der Nachweis, überprüft werden.

2.

Die Genotyp- und/oder Subtyperkennung ist durch geeignete Primer- oder Sondenauslegung nachzuweisen und durch Testen genotypisierter Bezugsproben zu validieren.

3.

Die potenzielle Kreuzreaktivität von Nicht-Ziel-Nukleinsäuresequenzen ist durch geeignete Primer- oder Sondenauslegung zu analysieren und durch Testen ausgewählter Proben zu validieren.

4.

Die Ergebnisse quantitativer NAT-Produkte müssen sich auf internationale Standards oder an ihnen kalibrierte Referenzmaterialien, sofern vorhanden, zurückführen lassen und in internationalen Einheiten ausgedrückt werden, die in dem speziellen Anwendungsbereich verwendet werden.

Leistungsmerkmal	Probe	Probenzahl, Merkmale, Verwendung	Akzeptanzkriterien
Analytische Sensitivität	Internationale Referenzpräparate	Die NAT-Sensitivität und die NAT-Nachweisgrenze sind durch Verdünnungsreihen von Referenzmaterialien zu validieren, wobei Replikate (mindestens 24) bei unterschiedlichen Analytenkonzentrationen zu testen sind, einschließlich derjenigen mit einem Übergang von positiven zu negativen Ergebnissen im jeweiligen NAT-Produkt. Die Nachweisgrenze wird als 95 % positiver Cut-off-Wert (IE/ml) nach statistischer Analyse (z. B. Probitanalyse) ausgedrückt.(2) Quantitative NAT: Festlegung der unteren/oberen Quantifizierungsgrenze, Präzision, Genauigkeit, „linearer” Messbereich, „dynamischer Bereich” . Reproduzierbarkeit bei verschiedenen Konzentrationsstufen	Dem Stand der Technik entsprechend
HTLV-I- und HTLV-II-Genotyp-Sensitivität	Alle relevanten Genotypen, vorzugsweise von internationalen Referenzmaterialien Potenzieller Ersatz für seltene HTLV-Genotypen (mit geeigneten Verfahren zu quantifizieren): Zellkulturüberstände, In-vitro-Transkripte, Plasmide	Qualitative NAT: mindestens 10 Proben/Genotyp oder Subtyp Quantitative NAT: Verdünnungsreihen zum Nachweis der Effizienz der quantitativen Bestimmung	Dem Stand der Technik entsprechend
Diagnostische Spezifität	Blutspenderproben	Qualitative NAT: ≥ 500 Quantitative NAT: ≥ 100	Dem Stand der Technik entsprechend
Kreuzreaktivität	Proben mit möglicher Kreuzreaktion	≥ 10 Proben, die für humane Retroviren (z. B. HIV-1, HIV-2) positiv sind	Dem Stand der Technik entsprechend
Verschleppungen	Hoch HTLV-RNA-positiv; HTLV-RNA-negativ	Es sind mindestens fünf Testreihen mit abwechselnd hoch positiven und negativen Proben während der Robustheitsprüfung durchzuführen. Die Virustiter der hoch positiven Proben müssen repräsentativ für natürlich vorkommende hohe Virustiter sein.	Dem Stand der Technik entsprechend
Nachweis in Abhängigkeit vom Antikörperstatus	HTLV-RNA-positive Proben: Anti-HTLV-negativ, Anti-HTLV-positiv	Proben vor der Serokonversion (Anti-HTLV-negativ) und nach der Serokonversion (Anti-HTLV-positiv)	Dem Stand der Technik entsprechend
Fehlerrate des Gesamtsystems	Schwach HTLV-RNA-positiv	≥ 100 schwach HTLV-RNA-positive Proben sind zu testen. Diese Proben müssen eine Viruskonzentration enthalten, die dem Dreifachen der Viruskonzentration des 95 % positiven Cut-Off-Wertes entspricht.	≥ 99 % positiv